借助于病毒颗粒作为基因的载体,利用病毒的侵染特性,自发的侵染哺乳动物细胞,将目的基因导入哺乳动物细胞中,以完成目的产物的超量表达或干涉。该技术目前在基因、小RNA、转录因子等功能验证领域以及重组蛋白表达、转基因哺乳动物制备等领域作为一种主要的技术手段被广泛使用。该技术体系主要由病毒包装和病毒侵染筛选两个部分组成(如图所示)。病毒包装就是借助基因工程的方法将目的基因片段与人为改造病毒的基因组通过特殊的位点连接起来形成重组病毒基因组以及重组病毒制备的过程,常规使用的病毒包装系统有慢病毒包装系统和腺病毒包装系统。包装好的慢病毒和腺病毒都可以自主的侵染哺乳动物细胞,导入外源基因。
慢病毒包装系统采用的是人工改造过后的HIV病毒系统,包括1个表达质粒和多个辅助质粒,通常采用293T细胞作为宿主繁育病毒,包装好的重组病毒侵染细胞,会将目的基因随机、稳定的插入宿主细胞基因组,实现目的基因稳定、长期的表达目的产物。腺病毒表达系统采用的是人工改造过后的Ad5病毒系统,通常包括1个表达质粒和1到多个辅助质粒,通常采用293细胞作为宿主繁育病毒,包装好的重组病毒侵染细胞,目的基因游离于宿主细胞基因组独立表达,可实现目的产物快速、高丰度的表达,同时避免因为基因整合而产生的基因突变现象。尽管慢病毒表达系统和腺病毒表达系统在实验中被广泛应用,但是这两种不同的表达系统在动物和细胞实验中具有不同的使用范围,产生的效果也存在很大的差异(如表1所示)。
慢病毒和腺病毒的区别?
慢病毒较好些,要看你做什么实验了。什么是慢病毒、腺病毒及腺相关病毒,他们在科研领域的主要应用和特点分别是什么?
慢病毒: